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梯度洗脫方法分離頭孢類藥物

時間:2011-12-22 點擊次數(shù):4961

梯度洗脫方法分離頭孢類藥物

 

一、試驗方法

Cometro高效液相色譜系統(tǒng)

色譜柱: Kromasil BDS C18,250*4.6mm,5um

流動相:A 磷酸鹽緩沖溶液(0.87g磷酸二氫鉀與0.22g無水磷酸氫二鈉,加水稀釋至1000ml,搖勻)-乙腈-三乙胺(95:5:1

       B 乙腈

檢測波長:254nm

流速:1ml/min

樣品:頭孢氨芐樣品(0.2mg/ml),頭孢地嗪鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢呋辛鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢克洛樣品(0.2mg/ml),頭孢拉定樣品(0.2mg/ml),頭孢羥氨芐樣品(0.2mg/ml),頭孢西丁鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢唑肟鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢類混合樣品。

進樣量:10ul

二、實驗結(jié)果與分析

1. 等度實驗

流動相:磷酸鹽緩沖溶液-乙腈-三乙胺(80:20:1),將不同樣品分別進樣,將分析結(jié)果疊加到同一張色譜圖上。

放大譜圖,在3-4min的峰有重疊,若在相同條件下,混合樣品中各組分將無法分開。

2. 梯度試驗

梯度方案

時間/min

流動相A/%

流動相B/%

0

100

0

15

68

32

18

68

32

20

100

0

 

 

Retention Time

Theoretical plates (USP)

Resolution (USP)

10.145

87953

0.00000

11.895

161617

13.71554

12.518

190195

5.34659

12.735

146310

1.74737

13.022

198555

2.29271

15.637

152900

18.89121

16.270

172834

4.00212

16.497

224280

1.53216

 

混合物中八種組分完全分開,分離度達到要求。

三、結(jié)論

梯度洗脫方法可以通過連續(xù)或間斷地改變流動相的組成,調(diào)節(jié)流動相極性,使每個流出組分都有合適的容量因子k′,使在等度系統(tǒng)中無法分離的樣品得到良好的分離效果。

 

 

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