梯度洗脫方法分離頭孢類藥物
時間:2011-12-22 點擊次數(shù):4961
梯度洗脫方法分離頭孢類藥物
一、試驗方法
Cometro高效液相色譜系統(tǒng)
色譜柱: Kromasil BDS C18,250*4.6mm,5um
流動相:A 磷酸鹽緩沖溶液(0.87g磷酸二氫鉀與0.22g無水磷酸氫二鈉,加水稀釋至1000ml,搖勻)-乙腈-三乙胺(95:5:1)
B 乙腈
檢測波長:254nm
流速:1ml/min
樣品:頭孢氨芐樣品(0.2mg/ml),頭孢地嗪鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢呋辛鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢克洛樣品(0.2mg/ml),頭孢拉定樣品(0.2mg/ml),頭孢羥氨芐樣品(0.2mg/ml),頭孢西丁鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢唑肟鈉樣品(0.2mg/ml),頭孢類混合樣品。
進樣量:10ul
二、實驗結(jié)果與分析
1. 等度實驗
流動相:磷酸鹽緩沖溶液-乙腈-三乙胺(80:20:1),將不同樣品分別進樣,將分析結(jié)果疊加到同一張色譜圖上。
放大譜圖,在3-4min的峰有重疊,若在相同條件下,混合樣品中各組分將無法分開。
2. 梯度試驗
梯度方案
時間/min
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流動相A/%
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流動相B/%
|
0
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100
|
0
|
15
|
68
|
32
|
18
|
68
|
32
|
20
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100
|
0
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Retention Time
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Theoretical plates (USP)
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Resolution (USP)
|
10.145
|
87953
|
0.00000
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11.895
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161617
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13.71554
|
12.518
|
190195
|
5.34659
|
12.735
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146310
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1.74737
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13.022
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198555
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2.29271
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15.637
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152900
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18.89121
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16.270
|
172834
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4.00212
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16.497
|
224280
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1.53216
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混合物中八種組分完全分開,分離度達到要求。
三、結(jié)論
梯度洗脫方法可以通過連續(xù)或間斷地改變流動相的組成,調(diào)節(jié)流動相極性,使每個流出組分都有合適的容量因子k′,使在等度系統(tǒng)中無法分離的樣品得到良好的分離效果。