HPLC使用注意事項

      1.流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。

      2.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。

      3.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。

      4.使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)沖 洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。

      5.長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如甲醇等)，因為純水易長霉。

      6.每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。

      7.C18柱不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。

      8.堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法：①以異丙醇作溶劑沖洗；②放在異丙醇中間用超聲波清洗；③用10％稀硝酸清洗。

      9.氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。

      10.如果進液管內(nèi)不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清洗。

      11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。

12.更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的 流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。

13.峰形問題：按常規(guī)峰寬應該在譜圖上從頭到尾以正常順序增加。峰不對稱性可能是多方面原因造成的：色譜系統(tǒng)、柱、進樣程序、流路系統(tǒng)、樣品組成等，輕微的拖尾是正常的。分析拖尾應從原因聯(lián)系考慮----用的什么色譜方法、樣品的結構、流動相組成和PH以及在分離條件下樣品是離子型或分子型。

表一、峰形的影響原因