黃曲霉毒素是黃曲霉在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中產(chǎn)生的一組有毒代謝產(chǎn)物，黃曲霉毒素主要污染糧食和油料作物，如花生、玉米、大米、棉籽等。黃曲霉毒素對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。因此國(guó)際上對(duì)食品中黃曲霉毒素有嚴(yán)格的限量要求。
本文采用高效液相熒光檢測(cè)器—柱后衍生法對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)色譜柱的選擇，流動(dòng)相配比的優(yōu)化以及檢測(cè)器條件的調(diào)整等手段，以期得到黃曲霉毒素的分離效果。
一、實(shí)驗(yàn)方法
Cometro高效液相色譜系統(tǒng)；
熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm；
Cometro柱后衍生系統(tǒng)，柱后衍生70度，衍生劑：碘的0.03%甲醇水溶液，流速0.3ml/min；
流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水；
流速：0.8ml/min；
色譜柱：多種品牌的十八烷基鍵合硅膠柱；
樣品：黃曲霉毒素儲(chǔ)備液；
二、結(jié)果與分析
1、色譜柱的選型
采用四種不同品牌的C18色譜柱，分別標(biāo)記為進(jìn)口柱1、進(jìn)口柱2、進(jìn)口柱3、Comatex柱。流動(dòng)相比例為甲醇-乙腈-水=40:18:42，進(jìn)樣量為10μl，比較其分離效果。
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，四種不同填料的色譜柱中，Comatex柱的分離效果，但仍然不能得到一個(gè)良好的分離度，因此，通過(guò)改變流動(dòng)相的比例來(lái)進(jìn)一步改善分離效果。
2、流動(dòng)相配比的優(yōu)化
通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，選擇分離效果的Comatex柱，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的比例為甲醇-乙腈-水=40:10:50，其他實(shí)驗(yàn)條件不變。
在該條件下，可以得到一個(gè)較好的分離效果。
3、檢測(cè)器條件的調(diào)整
將工作液稀釋25倍后，進(jìn)樣量分別為5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，測(cè)定樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
噪音大靈敏度低，信噪比、分離度差。
優(yōu)化調(diào)整檢測(cè)器條件，使用Comatex C18色譜柱，優(yōu)化流動(dòng)相，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。
上述結(jié)果顯示，基線噪音（0.2mv），靈敏度，信噪比（>10），柱效（>9000），主峰之間的分離度（>1.5）。
三、結(jié)論
通過(guò)色譜柱的選擇，流動(dòng)相配比的優(yōu)化，以及燈的能量的調(diào)節(jié)，可以提高分離度，降低噪音，提高靈敏度，得到良好的分離效果。采用高效液相熒光檢測(cè)器-柱后衍生法測(cè)定黃曲霉毒素，選用Comatex色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水=40:10:50；優(yōu)化檢測(cè)器條件，可以得到分離效果。
天津市琛航科技儀器有限公司
聯(lián)系電話: 022-58693245/46/47 傳真: 022-83716489 E-mail: sales@scienhome.com
