液相色譜中使用C18柱的反相色譜法以生物體相關(guān)物質(zhì)為分析對象，能夠滿足主要研究領(lǐng)域的需要，使用為廣泛。而隨著硅膠原料、鍵合方式、封尾方式的不同，生產(chǎn)出的色譜柱性能也不同，市場上則因此有數(shù)以百計性能不同的C18柱。而評價這些色譜柱的性能一般需要從以下4點入手：

1、對化合物的保留能力；

2、對酸性及中性化合物的理論塔板數(shù)和峰形；

3、對極性（堿性）化合物的峰形；

4、對配位化合物的峰形。

針對上述四點原則，本公司建立了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，以此來評價自己生產(chǎn)的C18色譜柱。

具體測定方法如下：

樣品：尿嘧啶-甲苯-苯乙烷-阿米替林-醌茜五種物質(zhì)混合物；

CoMetro高效液相色譜儀-等度系統(tǒng)（包括：6000LDI精密恒流泵，6000PVW紫外/可見可編程檢測器）；

紫外/可見檢測器：波長210nm；

流動相：5mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH=7）-甲醇=20:80；

流速：1.0mL/min；

柱溫：25℃

在此方法下，這五種物質(zhì)的色譜行為都能夠側(cè)面反映色譜柱某一項性能的大致情況，有較好的科學(xué)性和說服力，這五種物質(zhì)的結(jié)構(gòu)是及具體作用如下：

尿嘧啶	典型的極性化合物，親水性極強，在C18色譜柱中幾乎沒有保留，則可以用來測定系統(tǒng)的死時間。
甲苯/苯乙烷	非極性化合物，不會與C18色譜柱中的殘余硅羥基作用，則可以用來標(biāo)定色譜柱的理論塔板數(shù)，同時保證其峰形良好也是對色譜柱的基本要求。
阿米替林	含氮有機堿，在中性環(huán)境下能形成穩(wěn)定的氮正離子，能與色譜柱中的殘余硅羥基形成靜電作用，其拖尾因子能側(cè)面反映色譜柱殘余硅羥基的數(shù)量。

 

 

醌茜	典型的螯合物，能與色譜柱中的金屬離子作用，其拖尾因子則可以側(cè)面反映出色譜柱中金屬離子的含量。